विधि 1: निष्कर्षण विधि (यह विधि वर्तमान में मेरे देश में कार्यरत है; यह कम शुद्धता प्रदान करती है लेकिन कम उत्पादन लागत प्रदान करती है।)
ऑक्सीटोसिन समाधान का निष्कर्षण: 100 ग्राम सूखे पश्च पिट्यूटरी पाउडर और 30 ग्राम क्वार्ट्ज पाउडर लें, उन्हें एक बॉल मिल में रखें, और आसुत जल डालें। इसी प्रक्रिया का उपयोग करके चार बार निष्कर्षण करें। प्रत्येक चरण के लिए जोड़े गए आसुत जल की मात्रा इस प्रकार है: पहले दो निष्कर्षणों के लिए 1.4 लीटर, और बाद के दो निष्कर्षणों के लिए 1.3 लीटर। प्रत्येक निष्कर्षण 45 मिनट के लिए किया जाता है, इसके बाद तरल एकत्र करने के लिए सेंट्रीफ्यूजेशन किया जाता है; फिर शेष अवशेष को आगे निष्कर्षण के अधीन किया जाता है। ऑक्सीटोसिन समाधान प्राप्त करने के लिए चार परिणामी अर्क को मिलाया जाता है। संक्षेप में: सूखा हुआ पोस्टीरियर पिट्यूटरी पाउडर [पानी, बॉल मिल] → ऑक्सीटोसिन अर्क → क्रोमैटोग्राफ़िक पृथक्करण।
1,500 ग्राम पूर्व-उपचारित सिंथेटिक जिओलाइट लें, उसमें 0.25% एसिटिक एसिड घोल का 20 लीटर मिलाएं, और हिलाने के बाद मिश्रण को आयन एक्सचेंज कॉलम में डालें। एक बार जब एसिटिक एसिड समाधान का स्तर जिओलाइट बिस्तर की सतह से 2-3 सेमी ऊपर एक बिंदु तक गिर जाए, तो तुरंत ऑक्सीटोसिन अर्क डालें। एक उचित प्रवाह दर बनाए रखें और परिणामी सफेद, अशांत एलुएट को इकट्ठा करें (इस अंश में मुख्य रूप से ऑक्सीटोसिन होता है; चूंकि ऑक्सीटोसिन का आइसोइलेक्ट्रिक बिंदु [pI] 7.7 है, जबकि वैसोप्रेसिन का pI 10.9 है - वैसोप्रेसिन आसानी से सकारात्मक आयन बनाता है और इस प्रकार स्तंभ पर अवशोषित हो जाता है)। जैसे ही अर्क का तरल स्तर जिओलाइट बिस्तर की सतह पर गिरता है, तुरंत आसुत जल डालें और प्रवाह बंद होने तक टर्बिड इलुएट एकत्र करना जारी रखें। ग्लेशियल एसिटिक एसिड का उपयोग करके एकत्रित टर्बिड एलुएट के पीएच को 3.5 तक समायोजित करें। घोल को पानी के स्नान में तेजी से 95 डिग्री तक गर्म करें, इस तापमान को 3 मिनट तक बनाए रखें, फिर घोल को तेजी से ठंडा करें और रात भर के लिए फ्रिज में रख दें। संक्षेप में: ऑक्सीटोसिन अर्क [एचएसी, सिंथेटिक जिओलाइट कॉलम] → टर्बिड एलुएट [एचएसी, हीटिंग] → अलग समाधान → सोखना और एलुशन। अगले दिन, प्रशीतित घोल को छान लें। छानने के लिए, हिलाते समय 10% बेंटोनाइट घोल मिलाएं (प्रति 100 एमएल छानने पर 3 एमएल घोल मिलाएं)। सोखने की सुविधा के लिए 1 घंटे तक हिलाते रहें, फिर मिश्रण को सेंट्रीफ्यूज करें। सल्फोसैलिसिलिक एसिड अभिकर्मक समाधान का उपयोग करके सतह पर तैरनेवाला तरल का परीक्षण करें; किसी भी अवक्षेप की अनुपस्थिति यह दर्शाती है कि सोखने की प्रक्रिया पूरी हो गई है। यदि सोखना अधूरा है, तो बेंटोनाइट उपचार प्रक्रिया को दोहराएं; बाद में, दोनों सोखना चरणों से प्राप्त बेंटोनाइट अवक्षेप को मिलाएं। बेंटोनाइट को 1% एसिटिक एसिड (क्रमशः 1.6 एल, 1.4 एल, 1.2 एल, और 0.8 एल की मात्रा के साथ) का उपयोग करके चार बार निस्तारित किया जाता है। प्रत्येक एलुएट के लिए, घोल को 80 डिग्री तक गर्म करने पर *टर्ट*-ब्यूटाइलट्राइक्लोराइड मिलाया जाता है; फिर तापमान को 95 डिग्री तक बढ़ाया जाता है, तेजी से 25 डिग्री तक ठंडा किया जाता है, और या तो फ़िल्टर किया जाता है या सेंट्रीफ्यूज किया जाता है। चार परिणामी फ़िल्ट्रेट को शक्ति और वैसोप्रेसिन सीमा निर्धारित करने के लिए संयोजित किया जाता है। प्रक्रिया प्रवाह इस प्रकार है: प्रशीतित समाधान [निस्पंदन] → निस्पंदन [बेंटोनाइट घोल] → सोखना [1% एचएसी] → एल्युएट। ऑक्सीटोसिन इंजेक्शन की तैयारी:
गुणवत्ता मानकों को पूरा करने वाले परखे गए ऑक्सीटोसिन घोल को 5 यू/एमएल या 10 यू/एमएल की सांद्रता में पतला किया जाता है। इसके बाद इसे नं . 4 या नं . 5 सिंटर ग्लास फ़नल के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है, एम्पौल में भरा जाता है, और अंतिम उत्पाद प्राप्त करने के लिए 30 मिनट के लिए 100 डिग्री पर बहती भाप का उपयोग करके निष्फल किया जाता है। प्रक्रिया प्रवाह इस प्रकार है: ऑक्सीटोसिन समाधान (परख स्वीकृत) [निस्पंदन, भरना, बंध्याकरण] → ऑक्सीटोसिन इंजेक्शन।
सिंथेटिक जिओलाइट का पुनर्जनन: सिंथेटिक जिओलाइट को आसुत जल से दो बार धोया जाता है। फिर, 1.5 लीटर पानी (500 ग्राम जिओलाइट के आधार पर गणना) और 150 ग्राम सोडियम क्लोराइड मिलाया जाता है, और वैसोप्रेसिन को धोने और हटाने के लिए मिश्रण को 2 घंटे तक हिलाया जाता है। जिओलाइट को तब तक आसुत जल से धोया जाता है जब तक कि कोई क्लोराइड आयन न रह जाए। उचित मात्रा में पानी मिलाया जाता है, और सोडियम हाइड्रॉक्साइड का उपयोग करके पीएच को 9 पर समायोजित किया जाता है; मिश्रण को 30 मिनट तक हिलाया जाता है, जिसके बाद सतह पर तैरनेवाला पदार्थ निथार लिया जाता है। जिओलाइट को आसुत जल से धोया जाता है, सल्फ्यूरिक एसिड का उपयोग करके पीएच को 5.5-6 पर समायोजित किया जाता है, और इसे लगभग तटस्थ होने तक पानी से फिर से धोया जाता है। फिर अतिरिक्त पानी निकालने के लिए इसे फ़िल्टर किया जाता है और भविष्य में उपयोग के लिए 105 डिग्री पर सुखाया जाता है। उपयोग से पहले, उचित मात्रा में पानी मिलाया जाता है, और भिगोने की अनुमति देने के लिए हिलाते समय पीएच को ग्लेशियल एसिटिक एसिड का उपयोग करके समायोजित किया जाता है। 10% बेंटोनाइट घोल की तैयारी: बेंटोनाइट और पानी को 1:10 के बड़े पैमाने पर - से - आयतन अनुपात में मिलाया जाता है। मिश्रण को लगभग 1 घंटे तक पीसा जाता है, इस दौरान 3.5 के स्थिर पीएच को बनाए रखने के लिए एसिटिक एसिड मिलाया जाता है। परिणामी घोल को भविष्य में उपयोग के लिए रेफ्रिजरेटर में संग्रहीत किया जाता है। विधि 2: रासायनिक संश्लेषण। सबसे पहले, हेप्टापेप्टाइड एमाइड (सेगमेंट 3-9) को बेंज़िलॉक्सीकार्बोनिल {{28}ल्यूसीन *पी*-नाइट्रोफिनाइल एस्टर से शुरू करके संश्लेषित किया जाता है; इसके बाद, बेंज़िलॉक्सीकार्बोनिल-S-बेंज़िलसिस्टीन-टायरोसिन एज़ाइड (सेगमेंट 1-2) संश्लेषित किया जाता है; और तीसरे चरण में ऑक्सीटोसिन का संश्लेषण किया जाता है।